Телефоны в Санкт-Петербурге
+7 (812) 336-50-02
+7 (812) 336-51-08
   
Content

  • Банк стволовых клеток
    пуповинной крови

    «Мы сохраним самое ценное»

    (812) 336-50-02
  • Медицинский центр
    «Покровский»

    «Новые технологии для вашего здоровья»

    (812) 336-50-02
  • Лабораторная диагностика
    (812) 336-50-02
  • Клеточные технологии

    «Новые технологии для вашего здоровья»

    (812) 336-50-02
  • Генетический центр «Покровский»

    "Новые технологии для Вашего здоровья"

    (812) 336-50-02

Специалистам

Какие лабораторные тесты используются для идентификации эмбриональных стволовых клеток?

Добрый день!

На разных этапах в течение процесса генерирования линий эмбриональных стволовых клеток, ученые тестируют клетки, чтобы удостовериться, что они обладают плюрипотентностью, присущей эмбриональным стволовым клеткам. Этот процесс называется характеризацией.

До сих пор ученые, которые изучают эмбриональные стволовые клетки человека не согласовали стандартной процедуры тестирования для определения клеточных фундаментальных свойств. По этой причине основная цель ISCF- это установление стандартных универсальных критериев для выделения, характеристики и поддержки стволовых клеток посредством ряда характеристических проектов. Также, ученым известно, что многие из тестов, которые они используют на данный момент, не могут быть оптимальным индикатором ключевых биологических свойств клеток и функций.

Эти тесты включают в себя:

  • Выращивание и субкультивирование стволовых клеток в течение многих месяцев. Это подтверждает, что клетки способны поддерживать себя в течение длительного периода времени. Ученые проводят тестирование культуры под микроскопом для того, чтобы видеть, что клетки выглядят здоровыми и остаются недифференцированными.

  • Специальные методы для определения присутствия поверхностных маркеров, которые были найдены лишь на недифференцированных клетках. Другой важный тест- определение присутствие протеина Oct-4, продуцируемого недифференцированными клетками. Oct-4 является транскипционным фактором, ответственным за включение и выключение генов в нужное время, что является важной частью процесса клеточной дифференцировки и развития эмбриона.

  • Цитогенетическая диагностика. Этот метод непригоден для определения генетических мутаций в клетках.

  • Тестирование способности клеток к субкультивированию после замораживания-таяния либо после пересадки.

  • Определение плюрипотентности человеческих эмбриональных клеток при помощи: 1) спонтанной дифференцировки клеток в клеточной культуре; 2) манипулирования с клетками таким образом, что они будут дифференцироваться с формированием специфических типов клеток; 3) введение клеток в иммуносупрессированных мышей для тестирования формирования доброкачественных опухолей, названных тератомами.


    Каким образом стволовые клетки стимулируются для дифференцировки в специализированные клетки?

    Добрый день!

    При соблюдении определенных условий выращивания эмбриональных стволовых клеток они остаются недифференцированными. Однако, как только им будет позволено соединиться вместе для формирования эмбриональных тел, они начинают дифференцироваться спонтанно, образуя специализированные клетки мышц, нервные клетки, и много других типов клеток. Такая спонтанная дифференцировка является надежным индикатором того, что культура эмбриональных стволовых клеток является здоровой, однако такой вариант не является эффективным путем продукции культур специфических клеточных типов.

    Для генерирования специфических типов дифференцированных клеток- кардиомиоцитов, клеток крови, либо нервных клеток, к примеру, исследователи должны контролировать дифференцировку эмбриональных стволовых клеток. Они могут изменить химический состав культуральной среды, изменить поверхность культуральной посуды, либо модифицировать клетки с помощью введения специфических генов. Спустя годы экспериментов ученые установили некоторые базовые протоколы для направленной дифференциации эмбриональных стволовых клеток в определенные специфические типы клеток.

    Если ученые могут сознательно направить дифференцировку эмбриональных стволовых клеток в специфические типы клеток, они будут способны использовать полученные клетки для клинического применения в будущем. Болезни, которые можно лечить с помощью трансплантации клеток, генерированных из человеческих эмбриональных стволовых клеток включают в себя болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, сахарный диабет, травмы спинного мозга, инсульты, дегенерацию клеток Пуркинье, мышечную дистрофия Дюшена, заболевания сердца, остеоартриты, ревматоидные артриты, патологию зрения и слуха.  


    Как эмбриональные стволовые клетки растут в лаборатории?

    Добрый день!

    Эмбриональные стволовые клетки человека изолируют с помощью помещения эмбриобласта в чашку с культуральной средой. Клетки делятся и заполняют поверхность чашки. Внутренняя поверхность чашки обычно покрыта эмбриональными клетками кожи мыши, которые обрабатывают специальным образом для предотвращения их деления. Этот покровный слой называется питающим слоем клеток, также он служит для прикрепления клеток эмбриобласта к подложке. Клетки подложки выполняют паракринную и питающую функции. В последнее время ученые начали разрабатывать способы выращивания эмбриональных стволовых клеток без подстилающего слоя клеток мышей. Это значимое научное достижение, поскольку существует риск того, что вирусы либо другие макромолекулы из клеток мышей могут быть перенесены в клетки человека.

    Через несколько дней, клетки эмбриобласта пролиферируют и начинают заполнять поверхность чашки. Когда поверхность чашки полностью заполнена, клетки рассаживаются в другие чашки. Процесс рассаживания клеток в другие чашки повторяется многократно в течение многих месяцев и называется субкультивированием. Каждый цикл субкультивирования называется пассажем. После шести месяцев и более субкультивирования, первоначальные 30 клеток амниона производят миллионы эмбриональных стволовых клеток. Эмбриональные стволовые клетки, которые пролиферировали в клеточной культуре шесть месяцев или более без дифференцировки, и являются плюрипотентными и генетически нормальными, рассматриваются как линия эмбриональных стволовых клеток.


    Как и на какой стадии развития получают эмбриональные стволовые клетки для исследований?

    Добрый день!

    Эмбриональные стволовые клетки человека получают из яйцеклетки, оплодотворенной in vitro в центрах репродуктивной медицины и переданной для исследований после предварительного информирования доноров. Эти клетки не получают из яйцеклеток, оплодотворенных в теле человека. Эмбрионы, из которых получают стволовые клетки, называются бластоцисты, они имеют возраст шесть/семь дней и размер песчинки. Бластоциста состоит из трех элементов: трофобласт- слой клеток, что располагается по окружности бластоцисты; бластоцель- незаполненное пространство внутри бластоцисты; внутренняя клеточная масса (эмбриобласт)- группа из приблизительно 30 клеток, которая находится на одном из концов бластоцели.


    Почему не использовать в исследованиях соматические стволовые клетки взрослого человека вместо эмбриональных клеток человека?

    Добрый день!

    Эмбриональные стволовые клетки являются плюрипотентными, это означает, что они могут быть дифференцированы во все типы клеток организма. Соматические стволовые клетки взрослого человека ограничены в дифференцировке во все типы клеток материнской ткани. Однако, сейчас доказано, что некоторые соматические стволовые клетки взрослого человека, которые рассматриваются как мультипотентные, способны дифференцироваться в определенные специализированные клетки.

    Для заместительной терапии стволовыми клетками требуется большое количество клеток. В то время как большое число эмбриональных стволовых клеток может быть относительно легко выращено в культуре, взрослые стволовые клетки довольно редко встречаются в зрелой ткани и методы для увеличения их числа в культуре клеток должны быть в достаточной степени усовершенствованы.