Телефоны в Санкт-Петербурге
+7 (812) 336-50-02
+7 (812) 336-51-08
   
Content

  • Банк стволовых клеток
    пуповинной крови
  • Медицинский центр
    «Покровский»
  • Лабораторная диагностика
  • Клеточные технологии
  • Генетический центр «Покровский»

Внутриклеточные иммуноглобулины в клетках линий Namalva и U266 при сокультивировании с мезенхимными стромальными клетками

Резюме

   Большинство опубликованных данных о действии мезенхимных стромальных клеток (МСК) на продукцию иммуноглобулинов (Ig) клетками B-лимфоидного ряда были получены при изучении МСК костного мозга. Свойства МСК, выделенных из других тканей, в этом отношении мало изучены, а имеющиеся сведения противоречивы. В работе исследовали влияние на продукцию IgM и IgE в В-клеточных линиях Namalva и U266 культур МСК, выделенных из разных источников и находящихся в экспоненциальной или стационарной фазах роста. Культуры МСК были получены из костного мозга, жировой ткани и из пупочного канатика здоровых доноров, а также из костного мозга пациентов с аутоиммунными заболеваниями. МСК этих культур обладали сходным фенотипом поверхностных маркеров. Для контактного cокультивирования с лимфоидными клетками использовали культуры МСК 3-4 пассажей. Внутриклеточные Ig выявляли с помощью проточной цитофлуорометрии клеток, окрашенных меченными флуоресцеином моноклональными антителами против IgM или против IgE. МСК из костного мозга здоровых доноров, вне зависимости от фазы роста культур, не влияли на синтез IgM клетками Namalva и IgE клетками линии U266. Пролиферирующие МСК костного мозга, выделенные от пациента с болезнью Крона и от пациента с рассеянным склерозом, при сокультивировании с лимфоидными клетками обеих линий, повышали продукцию Ig. Культуры МСК жировой ткани и пупочного канатика в экспоненциальной фазе роста стимулировали синтез Ig лимфоидными клетками. Стационарные культуры МСК усиливали продукцию IgM в клетках Namalva и подавляли синтез IgE в клетках U266. Факторы, стимулирующие накопление IgE миеломными клетками, продуцировали только пролиферирующие МСК.

   Таким образом МСК, полученные из разных источников, имея сходный фенотип, различаются по способности модулировать продукцию Ig в клетках В-лимфоидного ряда. Эффект действия МСК определяется фазой роста культуры и может быть различным в отношении лимфобластоидных и миеломных клеток.

   Мезенхимные стромальные (стволовые) клетки (МСК) были впервые описаны как недифференцированные фибробласто-подобные элементы костного мозга взрослых особей, способные при культивировании распластываться на поверхности пластика, расти при низкой плотности в виде отдельных колоний и дифференцироваться в клетки жировой, хрящевой и костной тканей (Bianco, Gehron, 2000, Friedenstein et al, 1968, Pittenger et al. 1999). МСК могут также давать начало клеткам эндотелия (Oswald et al. 2004), кардиомиоцитам (Tomchuck et al, 2008), нейронам и астроцитам (Jori et al, 2005). Основным источником материала для исследований МСК длительное время служил костный мозг лабораторных животных и человека. В последние годы привлекают внимание МСК, выделенные из жировой ткани взрослых людей (Zimmerlin et al. 2010) и из соединительной ткани пупочного канатика (Romanov et al. 2003, Sarugaser et al.2005), поскольку, обладая сходным дифференцировочным потенциалом и иммуннофенотипом (CD105, CD90, CD44, CD73, Stro-1, CD166), они отличаются более высокой пролиферативной активностью (Kern et al., 2006).

   В 2002-2003 гг были опубликованы сообщения о неизвестной ранее способности МСК ингибировать пролиферацию Т-лимфоцитов (Bartholomew et al., 2002, Di Nicola et al., 2002, Le Blanc, 2003)]. При дальнейших исследованиях было установлено, что влияние МСК распространяется и на другие клетки иммунной системы (естественные киллеры, дендритные клетки, регуляторные Т-лимфоциты и B-лимфоциты). Согласно мнению экспертов, способность МСК выступать в роли иммуномодуляторов может найти применение при пересадке органов и тканей, лечении проявлений тканевой несовместимости, аутоиммунных и аллергических заболеваний (Tyndall et al., 2007). Аналогичная точка зрения отражена в обзорах, обобщающих итоги исследований данного направления (Кругляков и др., 2006, Rasmusson, 2006, Uccelli et al., 2006].

   Проявления и механизмы иммуномодулирующей активности МСК изучены недостаточно. Так, не достигнута ясность относительно влияния МСК на пролиферацию, дифференцировку и функциональную активность В-лимфоцитов и плазматических клеток-продуцентов антител. Описано как супрессорное (Corcione et al., 2008, Che et al., 2012), так и стимулирующее влияние МСК на пролиферацию B-лимфоцитов и на синтез антител (Traggiai еt al., 2008, Rasmusson еt al., 2007). Предполагают, что противоречия обусловлены различиями в условиях постановки экспериментов и могут быть устранены в ходе дальнейших исследований (Franquesa and Hoogduijn, 2012). В ряде работ в качестве тест-объектов действия МСК использовали постоянные В-клеточные линии (Amé-Thomas et al., 2007, Bocelli-Tyndall et al., 2007), преимущества которых состоят в стабильной пролиферации и конститутивной продукции иммуноглобулинов (Ig) разных классов.

   Цель настоящей работы состояла в изучении влияния культур МСК из разных источников, находящихся в экпоненциальной или стационарной фазах роста, на продукцию IgM и IgE в В-клеточных линиях Namalva и U266 соответственно.

Материалы и методы

   Получение и культивирование МСК. В качестве источников МСК использовали образцы костного мозга, жировой ткани и пупочного канатика, полученные при наличии информированного согласия доноров материала.

   Костный мозг (КМ) получали из подвздошной кости от двух здоровых доноров и двух пациентов с иммунопатологическими состояниями в стадии обострения (болезнь Крона и рассеянный склероз). Аспират КМ разделяли центрифугированием (400 g, 30 мин) в градиенте фиколла (БиолоТ, Россия). Фракцию лейкоцитов на границе фаз собирали, промывали раствором фосфатно-солевого буфера (ФСР), после чего вносили в полную питательную среду (Advanced Mesenchymal Stem Cells Media, HyClone, Новая Зеландия) c добавлением 20 % заменителя сыворотки (Hyclone, Новая Зеландия) и высевали во флаконы (площадь 75 см2, плотность 100 тыс. кл/см2). Через 3 дня проводили смену среды для удаления неприкрепившихся клеток.

   Образцы подкожной жировой ткани были получены от двух здоровых доноров. Ткань механически измельчали, затем инкубировали при 370С в 0,2 % растворе коллагеназы (тип I, Sigma-Aldrich, США) в ФСР. Диссоциированные клетки отмывали от фермента центрифугированием (400 G, 10 мин) и высевали во флаконы при плотности 100–400 тыс. кл/см2. Смену среды проводили через 24 ч.

   Пупочный канатик был получен при неосложненных родах. Сосуды канатика промывали ФСР, заполняли 0,2 % раствором коллагеназы (тип IV, Sigma-Aldrich, США) в том же буфере, промывали и повторно заполняли раствором коллагеназы, затем клеммировали с двух сторон и инкубировали в течение 1 ч при 370 С. Полученную взвесь клеток отмывали от фермента центрифугированием (400 G, 10 мин) и высевали во флаконы при плотности 100–400 тыс кл/см2. Смену среды проводили через 3 суток.

   При достижении 70-80 % конфлюентности монослоя МСК пересевали при плотности 5000 кл/см2 и культивировали в полной питательной среде с 10 % заменителя сыворотки.

   В экспериментах использовали культуры МСК 3-4 пассажей, находившиеся в фазе логарифмического роста (30-60% конфлуентности) или в стационарной фазе (100% конфлуентности).

   Поверхностные маркеры МСК выявляли с помощью меченных флуорохромами антител против CD34, CD45, CD90, CD105, CD73 на проточном цитофлуориметре FC500 (Beckman Coulter, США) в соответствии с инструкцией производителя. Анализ полученных данных проводили с помощью программного обеспечения СХР.

   В-клеточные линии Namalva и U266 были были получены из Коллекции клеточных культур ИНЦ РАН. Клетки выращивали в среде IMDM с добавлением 7% сыворотки эмбрионов коров (Hyclone, Новая Зеландия). Подсчет клеток осуществляли с помощью автоматического клеточного счетчика (Beckman Coulter, США).

Сокультивирование МСК и клеток линий Namalva и U266

   Для опытов по сокультивированию МСК рассевали в ячейки 6-луночного планшета по 10-60 тыс кл/см2 в зависимости от требуемой плотности культуры. Перед началом сокультивирования c помощью инвертированного микроскопа визуально оценивали степень конфлюентности слоя МСК, и на основании этой оценки определяли фазу роста культуры (логарифмическая или стационарная). Через сутки в те же ячейки вносили клетки линий Namalva или U266 в равном соотношении с МСК.

   Сокультивирование проводили в течение 3 суток в среде IMDM с добавлением 7% сыворотки эмбрионов коров (Hyclone, Новая Зеландия). Контролем служили клетки линий Namalva и U266, культивируемые без МСК. Все эксперименты были поставлены в 2-4 повторностях.

   Выявление внутриклеточных Ig проводили с помощью проточной цитофлуорометрии с окраской меченными флуоресцеином моноклональными антителами, полученными в лаборатории гибридомной технологии ФГБУ РНЦРХТ. Для детекции IgM в клетках линии Namalva использовали антитела М-2В9, для выявления IgE в линии U266 – антитела клона E-5D4. Клетки, находящиеся в суспензии, отбирали из лунок, после чего лунки промывали раствором версена и собирали клетки, прикрепившиеся к монослою МСК. Затем клетки отмывали, фиксировали ледяным ацетоном, пермеабилизовали 0,1 % раствором тритона Х-100 на ФСР 15 мин и окрашивали соответствующими меченными антителами в течение 10 минут в темноте при комнатной температуре. Измерения проводили с помощью проточного цитофлуориметра FC500 (Beckman Coulter, США) в соответствии с инструкцией производителя. Показателем содержания Ig являлась интенсивность флуоресценции отдельных клеток. На основе полученных данных строили графики распределения клеток по интенсивности флуоресценции и вычисляли средние значения (Xmean) интенсивности флуоресценции в относительных единицах. Пример анализа полученных данных приведен на рисунке 1. Каждый вариант сокультивирования проводили в четырех повторах. Полученные данные обрабатывали статистически с помощью программы Microsoft Exсel. Для каждой выборки определяли ошибку среднего по формуле М = σ / √ n.

Результаты и обсуждение

   Все культуры МСК были охарактеризованы по экспрессии поверхностных маркеров (таблица).

Таблица 1. Фенотип поверхностных антигенов культивируемых МСК, полученных из разных источников
Антиген Доля клеток (%), имеющих антигены в культурах МСК из
костного мозга жировой ткани пупочного канатика
доноров пациента с рассеянным склерозом пациента с болезнью Крона
CD105 98±1 98 99 98±1 97,5±1
CD90 99±1 98 97 97,5±2 98±2
CD73 97,5±2 98 98 99±1 96,5±2
CD13 98±1 99 99,5 97±2 99±1
CD44 97±3 98,5 97,5 99±1 98±1
CD34 0 0,1 0 0 0,1
CD45 0,2 0 0,1 0 0
CD117 0,3 0,2 0,1 0 0

   Из приведенных данных следует, что из разных источников были получены однородные культуры МСК, обладающие сходным иммунофенотипом.

   При сокультивировании с МСК из костного мозга здоровых доноров содержание внутриклеточного IgM в клетках линии Namalva оставалось на уровне контрольных значений вне зависимости от состояния конфлюентности монослоя МСК (рис. 2). Достоверное увеличение содержания IgM наблюдали при сокультивировании клеток Namalva с МСК жировой ткани. Культуры, находящиеся в логарифмической или в стационарной фазах роста, стимулировали синтез IgM одинаково эффективно. МСК из пупочного канатика также вызывали увеличение уровня IgM. Усиление продукции IgM происходило и при сокультивировании клеток Namalva с МСК из костного мозга пациентов с болезнью Крона и рассеянным склерозом. При этом различий между влиянием МСК, находящихся в логарифмической или в стационарной фазах роста культуры, не наблюдали. Таким образом, МСК из разных источников при контактном сокультивировании с клетками Namalva, либо не влияли на содержание цитоплазматического IgM, либо вызывали его увеличение. Действие МСК, пролиферирующих или покоящихся, было одинаковым.

   Так же, как в опытах с клетками Namalva, МСК из костного мозга здоровых доноров, не оказывали влияния на уровень продукции IgE клетками линии U266 (рис. 3). МСК из жировой ткани и пупочного канатика усиливали продукцию IgE, если находились в фазе логарифмического роста. Культуры МСК, прекратившие пролиферацию вследствие достижения 100%-ного монослоя, оказывали слабое тормозящее действие на накопление IgE. Наибольшее влияние на продукцию IgE клетками U266 наблюдали при сокультивировании с пролиферирующими МСК пациентов, страдающих аутоиммунными заболеваниями. Присутствие покоящихся МСК оказывало на синтез IgE слабый тормозящий эффект. Таким образом, при сокультивировании с миеломными клетками U266, пролиферирующие МСК могут оказывать стимулирующее действие на накопление IgE, тогда как МСК в стационарной фазе проявляют ингибирующий эффект.

   Результаты работы, несмотря на небольшое количество исследованных в ней образцов, позволяют заключить, что МСК, выделенные из разных источников, различаются по способности модулировать продукцию Ig в клетках В-лимфоидного ряда. МСК из костного мозга здоровых доноров, вне зависимости от фазы роста культур, не влияли на синтез IgM и IgE. Пролиферирующие МСК костного мозга пациентов с аутоиммунными заболеваниями в стадии обострения, оказывали стимулирующее влияние на продукцию Ig в обеих клеточных линиях. МСК жировой ткани и пупочного канатика здоровых доноров принципиально не отличались между собой по действию на синтез Ig лимфоидными клетками. Таким образом, результаты исследования свидетельствуют о том, что МСК, выделенные из разных источников, имея сходный фенотип поверхностных антигенов, обладают разными функциональными свойствами. Это согласуется с представлениями о неравнозначности МСК разных тканей и о необходимости выработать более широкий набор базовых критериев для характеристики этих клеток (Li et al., 2009, Strioga et al., 2012 , Wagnera et al., 2005,).

   Использованные в настоящей работе в качестве тест-объектов клеточные линии представляют собой производные В-лимфоцитов, иммортализованные на разных стадиях дифференцировки. Лимфобластоидная линия Namalva продуцирует IgM, что указывает на ее происхождение из В-клеток ранних стадий созревания (Guy et al., 1987). Миеломная линия U266 является потомком клона зрелых плазматических клеток, трансформированных на одной из поздних фаз развития, после активации гена, кодирующего синтез эпсилон-цепи IgE (Nilsson, 1971, Hardy, Hayakawa, 2001). Из приведенных данных следует, что МСК могут по-разному влиять на продукцию Ig лимфобластоидными и миеломными клетками. На лимфобластоидные клетки МСК оказывали стимулирующее действие, либо не оказывали эффекта, тогда как продукцию IgE миеломными клетками они могли также и подавлять. Факторы, стимулирующие накопление IgE миеломными клетками, продуцировали только пролиферирующие МСК. Представленные в работе результаты могут объяснять ряд имеющихся в литературе противоречий относительно способности МСК влиять на продукцию Ig клетками B-лимфоидного ряда. В частности, расхождения в оценке действия МСК жировой ткани на содержание Ig в клетках Namalva и U266, с данными, описанными ранее (Самойлович и др., 2013), могут быть связаны с отличиями в фазах роста культур МСК, в численном соотношении МСК и лимфоидных клеток, а также в сроках сокультивирования. При оценке влияния МСК на продукцию Ig надо также принимать во внимание, что лимфоидные клетки, представляющие разные стадии дифференцировки, могут стимулировать МСК к выработке разных цитокинов и ростовых факторов. Этот аспект взаимодействия МСК и B-лимфоидных клеток остается наименее изученным и требует дальнейших исследований.

Внутриклеточные иммуноглобулины в клетках линий Namalva и U266 при сокультивировании с мезенхимными стромальными клетками   Рисунок 1. Распределение интенсивности флуоресценции окрашенных антителами против IgM клеток Namalva в монокультуре (контроль) или при контактном сокультивировании с МСК КМ пациента с болезнью Крона.


Внутриклеточные иммуноглобулины в клетках линий Namalva и U266 при сокультивировании с мезенхимными стромальными клетками   Рисунок 2. Уровень внутриклеточного IgM в клетках линии Namalva при сокультивировании с МСК в экспоненциальной или стационарной фазах роста и полученых из разных источников МСК, 100% - культура МСК в стационарной фазе роста МСК, 30-60% - культура МСК в логарифмической фазе. На гистограммах отложены ошибки среднего. * - значения, достоверно отличные от контроля (pдов=95%).

Внутриклеточные иммуноглобулины в клетках линий Namalva и U266 при сокультивировании с мезенхимными стромальными клетками   Рисунок 3. Уровень внутриклеточного IgE в клетках линии U266 при сокультивировании с МСК в экспоненциальной или стационарной фазах роста и полученных из разных источников. Обозначения – те же, что на рисунке 2.

Список литературы

  1. Кругляков П.В., Лохматова Е.Л., Климович В.Б., Зарицкий А.Ю. 2006. Мезенхимные стволовые клетки и иммунопатологические состояния организма. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 1: 36-41.
  2. Самойлович М., Пиневич А.,.Шашкова О.,.Вартанян Н., Киселева Л., Климович В.. 2013. Влияние мезенхимных стромальных клеток на рост B-клеточных линий и синтез ими иммуноглобулинов. Цитология.55: 45-51.
  3. Amé-Thomas P, Maby-El Hajjami H, Monvoisin C, Jean R, Monnier D, Caulet-Maugendre S, Guillaudeux T, Lamy T, Fest T, Tarte K. 2007.Human mesenchymal stem cells isolated from bone marrow and lymphoid organs support tumor B-cell growth: role of stromal cells in follicular lymphoma pathogenesis.Blood. 109(2): 693-702.
  4. Bartholomew A., Sturgeon C., Siatskas M., Ferrer K., McIntosh K., Patil S., Hardy W., Devine S., Ucker D., Deans R., Moseley A., Hoffman R. 2002.Mesenchymal stem cells suppress lymphocyte proliferation in vitro and prolong skin graft survival in vivo. Exp. Hematol. 30: 42-48.
  5. Benjamin D , et al. Immunoglobulin secretion by cell lines derived from African and American undifferentiated lymphomas of Burkitt's and non-Burkitt's type. J. Immunol. 129: 1336-1342, 1982.
  6. Bianco P., Gehron R.P. 2000. Marrow stromal stem cells. J. Clin. Invest. 105: 1663-1668.
  7. Bocelli-Tyndall C., Bracci L., Spagnoli G., Braccini A., Bouchenaki M., Ceredig R., Pistoia V., Martin I., Tyndall A. 2007. Bone marrow mesenchymal stromal cells (BM-MSCs) from healthy donors and auto-immune disease patients reduce the proliferation of autologous- and allogeneic-stimulated lymphocytes in vitro. Rheumatology (Oxford). 46: 403-8.
  8. Corcione A., Benvenuto F., Ferretti E., Giunti D., Cappiello V., Cazzanti F., Risso M., Gualandi F., Mancardi G.L., Pistoia V., Uccelli A. 2006. Human mesenchymal stem cells modulate B-cell functions. Blood. 107: 367–372.
  9. Che N, Li X., Zhou Z., Liu R., Shi D., Lu L., Sun L. 2012. Umbilical cord mesenchymal stem cells suppress B-cell proliferation and differentiation. Cellular Immunology. 274: 46–5.
  10. Di Nicola M., Carlo-Stella C., Magni M., Milanesi M., Longoni P.D., Matteucci P., Grisanti S., Gianni A.M. 2002. Human bone marrow stromal cells suppress T-lymphocyte proliferation induced by cellular or nonspecific mitogenic stimuli. Blood. 99(10): 3838-43.
  11. Franquesa M, Hoogduijn MJ, Bestard O, Grinyó JM. Immunomodulatory effects of mesenchymal stem cells on B cells. 2012. Front Immunol. 3:212.
  12. Friedenstein A.J., Petrakova K.V., Kurolesova A.I., Frolova G.P. 1968. Heterotopic of bone marrow. Analysis of precursor cells for osteogenic and hematopoietic tissues. Transplantation. 6: 230-247.
  13. Guy K., Middleton P.G., Steel C.M. 1987. Variant sublines of the human B-lymphoma cells Namalwa are at different stages of differentiation. Immunology. 61: 383-386.
  14. Hardy R.R, Hayakawa K. 2001. B cell development pathways. Annu Rev Immunol.19:595-621.
  15. Jori F.P., Napolitano M.A., Melone M.A., Jori F.P., Napolitano M.A., Melone M.A., Cipollaro M., Cascino A., Altucci L., Peluso G., Giordano A., Galderisi U. 2005. Molecular pathways involved in neural in vitro differentiation of marrow stromal stem cells. J. Cell Biochem. 94: 645-655.
  16. Kern S., Eichler H., Stoeve J., Kluter H., Bieback K. 2006. Comparative Analysis of Mesenchymal Stem Cells from Bone Marrow, Umbilical Cord Blood, or Adipose Tissue. Stemcells. 24: 1294–1301.
  17. Le Blanc K., Tammik L., Sundberg B., Haynesworth S.E., Ringden O. 2003. Mesenchymal stem cells inhibit and stimulate mixed lymphocyte cultures and mitogenic responses independently of the major histocompatibility complex . Scand J. Immunol. 57: 11-20.
  18. Li G., Zhang X.A., Wang H., Wang X., Meng C.L., Chan C.Y., Yew D.T.W., Tsang K.S., Li K., Tsai S.N., Ngai S.M., Han Z.C., Lin M.C.M., He M.L., Kung H.F. 2009. Comparative proteomic analysis of mesenchymal stem cells derived from human bone marrow, umbilical cord, and placenta: implication in the migration. Proteomics. 9: 20–30.
  19. Nilsson K. 1971. Synthesis and secretion of IgE by an established human myeloma cell line. Clin. Exp. Immunol. 9: 785-793.
  20. Oswald J., Boxberger S., Jorgensen B., Feldmann S., Ehninger G., Bornhäuser M., Werner C. 2004. Mesenchymal stem cells can be differentiated into endothelial cells in vitro. Stem Cells. 22: 377-384.
  21. Pittenger M.F., Mackay A.M., Beck S.C., Jaiswal R.K., Douglas R., Mosca J.D., Moorman M.A., Simoneti D.W., Craig S., Marshak D.R. 1999. Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells. Science 284: 143-147.
  22. Rasmusson I. 2006. Immune modulation by mesenchymal stem cells. Exper. Cell Research. 312: 2169-2179.
  23. Rasmusson I., Le Blanc K., Sundberg B., Ringden O. 2007. Mesenchymal stem cells stimulate antibody secretion in human B cells. Scand. J. Immunol. 65: 336–343.
  24. Romanov Y.A., Svintsitskaya V.A., Smirnov V.N. 2003. Searching for alternative sources of postnatal human mesenchymal stem cells: candidate MSC-like cells from umbilical cord./ Stem Cells. 21: 105-110.
  25. Sarugaser R., Lickorish D., Baksh D., Hosseini M.M., Davies J.E. 2005. Human umbilical cord perivascular (HUCPV) cells: a source of mesenchymal progenitors. Stem Cells. 23: 220-229.
  26. Strioga M., Viswa N., Darinskas A., Slaby O., Michalek J. 2012 . Same or not same? Comparison of adipose tissue-derived versus bone-marrow-derived mesenchymal stem and stromal cells. Stem Cells and Development. 21: 2724-2752.
  27. Tomchuck S. V L., Zwezdaryk K.J., Coffelt S.B., Waterman,R.S., Danka E.S., Scandurro A.B. 2008. Toll-like receptors on human mesenchymal stem cells drive their migration and immunomodulating responses. Stem Cells. 26: 99-107.
  28. Traggiai E., Volpi S., Schena F., Gattorno M., Ferlito F., Moretta L., Martini A. 2008. Bone marrow-derived mesenchymal stem cells induce both polyclonal expansion and differentiation of B cells isolated from healthy donors and systemic lupus erythematosus patients. Stem Cells. 26: 562-569.
  29. Tyndall A., Walker U.A., Cope A., Dazzi F., De Bari C., Fibbe W., Guiducci S., Jones S., Jorgensen C., Le Blanc K., Luyten F., McGonagle D., Martin I., Bocelli-Tyndall C., Pennesi G., Pistoia V., Pitzalis C., Uccelli A., Wulffraat N., Feldmann M. 2007.Immunomodulatory properties of mesenchymal stem cells: a review based on an interdisciplinary meeting held at the Kennedy Institute of Rheumatology Division, London, UK, 31 October 2005. Arthritis Res. Ther. 9: 301-311.
  30. Uccelli A., Moretta L., Pistoia V. 2006. Immunoregulatory function of mesenchymal stem cells. Eur. J. Immunol. 36: 2566-2573.
  31. Wagnera W., Weina F., Seckingera A., Frankhauserb M., Wirknerc U., Krausea U., Blakec J,Schwagerc C., Ecksteina V., Ansorgec W., Hoa A.D. 2005. Comparative characteristics of mesenchymal stem cells from human bone marrow, adipose tissue, and umbilical cord blood.Experimental Hematology. 33: 1402–1416.
  32. Zimmerlin L., Donnenberg S., Pfeifer M. E., Meyer E.M., Péault B., Rubin J.P., Donnenberg A.D. 2010. Stromal vascular progenitors in adult human adipose tissue. Cytometry Part A. 77: 22-30.